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單抗藥物血藥濃度測定

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2018-03-30 16:37

在過去的數十年間,單克隆抗體 (mAb) 作為一類藥物應用在疾病的治療中發揮了重要作用。隨著人們對疾病相關生物分子理解的增加,單抗生產技術的進步,越來越多的分子靶點被鑒定出來用于藥物治療,促進了眾多單抗應用的腫瘤免疫靶向治療時代的到來。隨著“精準醫療”的不斷推進,以治療性單抗血藥濃度檢測作為患者個體化治療的用藥參考將是一個趨勢。

目前,用于單抗濃度測定的方法包括固相酶聯免疫吸附測定 (ELISA),流體液相放射免疫測定,流體液相移動性測定和報告基因測定,最常用的技術是ELISA。下面介紹三種有代表性的用于定量治療性抗體的免疫實驗方法。

三種檢測方法對比(以PD-1抗體為例):

檢測方法 包被 樣品 二抗 優勢 劣勢 案例分享
間接法 PD-1 待檢血樣 Goat anti-human IgG 方法開發簡單 非特異背景較高 案例一
抗體競爭法 PD-1 待檢血樣和標記的競爭抗體混合物 SA-HRP 非特異背景低 方法開發較復雜 案例二
配體競爭法 PD-L1 待檢血樣和標記的PD-1混合物 SA-HRP 非特異背景低 線性范圍較窄,方法開發較復雜 案例三

如果您有其他相關案例分享或者對以下某個案例細節感興趣,歡迎發送郵件至PK@acrobiosystems.com

案例詳情

案例一、間接法測定PD-1抗體藥血藥濃度

返回案例匯總

檢測方法:ELISA

檢測儀器:BMG CLARIOstar酶標儀

樣本信息:国产视频appPD-1抗體藥血清樣本

主要試劑:

  • Human PD-1蛋白 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5221);
  • Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific (Jackson, Cat.No. 109-035-098)
  • 簡要流程:

    • 1. 將human PD-1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5221) 以0.1ug/well的濃度包被到板上;
    • 2. 將PD-1抗體藥梯度稀釋到人血清中;
    • 3. 將稀釋過的PD-1抗體藥加到孔板中;
    • 4. 加入Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG二抗;
    • 5. TMB顯色。

    檢測結果:為避免非特異背景干擾,該方法血清樣本進行了1000倍稀釋,因此血清樣本檢測范圍0.19-6.25ug/ml,檢測靈敏度0.19ug/ml(見圖1)。

    圖1. 間接法測定PD-1抗體藥血藥濃度標準曲線

    相關產品:

    PD1-H5221 (Human PD-1 / PDCD1 Protein (HPLC-verified)) 點擊咨詢報價

    案例二、抗體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度

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    檢測方法:ELISA

    檢測儀器:国产视频appBMG CLARIOstar酶標儀

    樣本信息:国产视频appPD-1抗體藥血清樣本

    主要試劑:

  • ELISA Assay Kit for Anti-PD-1 h-mAb in Human Serum (ACROBiosystems, Cat.No. EPH-V1);
  • 簡要流程:

    • 1. 將human PD-1以0.1ug/well的濃度包被到板上;
    • 2. 將梯度稀釋的PD-1抗體藥和biotinylated anti-PD-1 antibody混合(血清終濃度10%);
    • 3. 將混合物加到孔板中;
    • 4. 加入Streptavidin Protein, HRP二抗;
    • 5. TMB顯色。

    檢測結果:該方法血清樣本檢測線性范圍0.78-25ug/ml,檢測靈敏度0.78ug/ml(見圖2)。

    圖2. 抗體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度標準曲線

    相關產品:

    EPH-V1 (ELISA Assay Kit for Anti-PD-1 h-mAb in Human Serum) 點擊咨詢報價

    案例三、配體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度

    返回案例匯總

    檢測方法:ELISA

    檢測儀器:国产视频appBMG CLARIOstar酶標儀

    樣本信息:PD-1抗體藥血清樣本

    主要試劑:

  • Human PD-L1蛋白 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5258);
  • Biotinylated human PD-1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H82F2);
  • Streptavidin Protein, HRP (Thermo, Cat.No. 21126)
  • 簡要流程:

    • 1. 將human PD-L1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5258) 以0.2ug/well的濃度包被到板上;
    • 2. 將梯度稀釋的PD-1抗體藥和biotinylated human PD-1混合(血清終濃度10%);
    • 3. 將混合物加到孔板中;
    • 4. 加入Streptavidin Protein, HRP二抗;
    • 5. TMB顯色。

    檢測結果:該方法血清樣本檢測線性范圍1.565-6.25ug/ml,檢測靈敏度1.565ug/ml(見圖3)。

    圖3. 配體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度標準曲線

    相關產品:

    PD1-H5258 (Human PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc Tag, low endotoxin) 點擊咨詢報價
    PD1-H82F2 (Biotinylated Human PD-1 / PDCD1, His Tag & Fc Tag, Avi Tag (Avitag?)) 點擊咨詢報價

    案例分析對比

    間接法ELISA測定pd-1.png
    競爭法ELISA測定pd-1.png
    圖4. 比較間接法和抗體競爭法檢測不同人給藥前血清樣本中的PD-1抗體濃度。
    案例名稱 線性范圍(ug/ml) 靈敏度(ug/ml) 特異性
    案例一:間接法測定PD-1抗體藥血藥濃度 0.19-6.25 0.19 非特異背景干擾較高
    案例二:抗體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度 0.78-25 0.78 非特異背景干擾非常低
    案例三:配體競爭法測定PD-1抗體藥血藥濃度 1.565-6.25 1.565 非特異背景干擾非常低

    比較上文三個案例,案例三配體競爭法線性范圍較窄,導致樣本稀釋過于繁瑣,且準確性較低。案例一間接法和案例二抗體競爭法相比,線性范圍接近,靈敏度接近。但是,案例一間接法所用二抗為Goat anti-human IgG,在血清中會有非特異性背景干擾,而案例二抗體競爭法使用和生物素結合的Streptavidin Protein, HRP作為檢測二抗,避免背景干擾(見圖4)。

    為了支持上述研究,ACROBiosystems公司采用案例二的抗體競爭法,開發了一系列ELISA血藥濃度定量檢測試劑盒,用于測定臨床前和臨床血液樣本中的抗體藥濃度。該系列產品經證實具有低背景、通用快速、高批間一致性等卓越的實驗表現。

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